Поліклональні антитіла

Поліклональні антитіла – це антитіла, синтезовані декількома різними лініями В-лімфоцитів, які специфічні до одного і того ж антигену. При цьому, важливо відзначити, що хоча антигенна мішень у них загальна, сайти зв’язування різні, тому що поліклональині антитіла зв’язуються з різними епітопами одного і того ж антигену.

Виробництво поліклональних антитіл включає в себе використання тварин як джерело В-лімфоцитів, які синтезують шукані антитіла. Підготовлений антиген вводиться в кровотік тварини в суміші з адьювантом (модулятором імунної відповіді), що призводить до гіперактивного імунної відповіді. Після серії ін’єкцій за певний період часу, антиген індукує вироблення В-лімфоцитами імуноглобулінів (антитіл) до внесеного антигену. Кров потім екстрагується з тваринного і очищається, з неї виділяються потрібні антитіла.

Цей процес найчастіше проводиться на відповідному ссавцю, такому як миша, кролик або коза. Більші ссавці краще, бо обсяг результуючої сироватки виходить вище. У лабораторних умовах, найчастіше, прагнуть отримувати антисироватки з високим титром і високою афінністю до антигену, і використовують для експериментів і діагностичних тестів, тому для успішного створення ефективної суміші антитіл керуються такими параметрами:

  1. Необхідний обсяг сироватки.
  2. Філогенетичні відносини між донором антигену і реципієнтом-виробником антитіла. Найчастіше, чим далі вони один від одного в еволюційному плані, тим вище потенціал створення сироватки з високим титром.
  3. Необхідні характеристики (клас, підклас, ізотип, тип компліменту) антитіл. Імунізація і флеботомія – стресогенні процедури, тому при використанні, наприклад, гризунів і кроликів, переважно включення в програму вільних від патогенів тварин. Використання цього типу тварин різко знижує захворюваність і смертність через перенесених патогенних організмів, наприклад, Pasteurella multocida у кроликів.

Для виробництва великих обсягів сироваток, найчастіше, використовуються коні і кози. Багато дослідників вважають за краще курчат,оскільки вони філогенетично більш віддалені від людини і інших ссавців. Крім того, кури переносять велику кількість антитіл в жовток яйця, що звільняє від необхідності забору крові. Тижневе яйце містить в 10 разів більший титр антитіл, ніж збирається методом флеботоміі у кролика за тиждень. Проте, існує ряд проблем, наприклад, імуноглобуліни курей не завжди мають потрібні параметри в плані специфічності до антигенів ссавців.

Найчастіше використовувана лабораторна тварина для виробництва поліклональних антитіл – миша домашня (Mus musculus), на жаль, їх невеликий розмір не дає можливості збирати великі обсяги сироваток.

При використанні кроликів найчастіше вибирають молодих тварин (2-3 кг вагою), тому що їх імунна відповідь найактивніша, і має тенденцію знижувати ефективність реакції з віком тварини. Переважно використовують самок, бо активність їх імунної системи вище, ніж у самців. Крім того, вони менш агресивні. Зазвичай використовується, як мінімум дві тварини на один антиген. Це знижує ризики провалу, пов’язаного з нереспондівністью одного з тварин на антиген.

Залишити відповідь

Top
ukUkrainian
en_GBEnglish ukUkrainian